從1999年4月開始，我們就開展了體外消化率法在水產飼料配方上應用的研究。通過大量的試驗，我們找出了體外消化率方法的合理酶用量和模擬魚腸道緩沖消化體系的pH值環境、反應時間及反應溫度，然后又通過大量的試驗篩選出了標準魚粉樣，初步為魚粉制定了體外消化率的質量指標，并從1999年7月起作為友誼飼料公司魚粉采購質量控制必檢指標之一。在體外消化率方法基本成熟的前提下，友誼飼料公司作為大型專業化水產飼料生產廠家之一，從我國漁業可持續發展與人民身體健康的角度出發，決定率先開發環保型優質魚用水產飼料系列。我們認為環保型優質魚用水產飼料應符合以下要求：①飼料中的各種營養能被魚體充分吸收，且魚體排泄到水中代謝物最少；②在魚體攝食之前，飼料能保持相對的穩定性，不能有過多的營養素溶解于水體中；③飼料主要是由各種優質原料合理搭配而成，不額外添加大量的有可能影響到人身體健康的促生長物質；④對人體有害的物質不能在魚體內蓄積；⑤用環保型飼料喂養的魚類，其魚肉營養價值及可食性不會比自然養殖的低；⑥在保證魚肉品質的前提下，魚類的各項生長指標處于較高的水平；⑦飼料營養物質能最大限度的被魚體吸收，促進飼料向優質動物蛋白源的轉化，提高人民的生活水平，
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體外消化率法之所以用于環保飼料的開發，是因為該方法能在較短時間內了解飼料原料的消化率數值，并能模擬每種魚類的腸道環境，對單一飼料進行消化率數值的測定，因而能較準確的判斷出魚類對具體的某種飼料原料的消化吸收情況，從而很好的指導飼料配方，為優質環保飼料的開發提供最直接的參考數據。下面將體外消化率法的一些內容簡單介紹如下，并附帶介紹一下我們的實驗結果：
1、體外消化率測定方法的原理
體外消化率測定方法的飼料樣品在酶的作用下將不溶性的大分子物質（如不溶性蛋白質、淀粉等）降解為可溶性的小分子物質（如肽、氨基酸、糊精、葡萄糖等），在體內這些降解產物可被動物消化道吸收進入體內，在離體條件下，這些物質可溶解于水中，最后，以產生的可溶解物質量占飼料樣品未消化前的百分比表示消化率的大小。
2、酶選擇
在體外消化率的初期，為篩選消化率高的飼料原料。一般采用多酶片作為體外消化率的主要用酶；在體外消化率的中后期，主要是通過提取魚類腸道（有胃魚類可采用胃部粗酶液一腸道粗酶液兩步酶解法，而對于無胃魚類，則可用腸道粗酶液）消化酶來進行體外消化率的實驗，以確定不同魚類對原料消化吸收情況的差異，從而篩選出魚類對不同原料的消化吸收數值，并依據動物性飼料與植物性飼料的分類體系（動物性飼料在我們進行的實驗中其數值與植物性飼料相比明顯偏低，然而在實際應用中我們往往認為動物性飼料比植物性飼料更易被動物消化吸收，即動物性飼料的氨基酸平衡要好于植物性飼料，故我們按照植物性與動物性飼料分類，把它們的消化率進行縱向比較，而不進行橫向比較）對常用飼料原料進行體外消化率數值由低到高排列，從而為飼料配方時飼料原料的優先選擇及飼料原料的用量比例提供參考。
3、實驗方法
3.1腸道粗酶液法
3.1.1腸道粗酶液的提取
(1)解剖正常吃食的元胃活魚，取魚體全部腸道，將腸道內容物擠凈、剪開，并用濾紙吸干腸道內外水分，稱重并記錄。
(2)將腸道剪碎，加入10倍（重量體積比）冷卻的磷酸緩沖溶液，放人組織勻漿機（或玻璃勻漿器）中勻漿。
(3)將勻漿好的腸道液無損轉移到離心機中，在3000r/m轉速下，離心15分鐘，取上清液，此為腸道粗酶液。
3.1.2樣品消化
(1)樣品的粉碎：欲消化的樣品應通過40目金屬篩。
(2)稱樣：稱取需消化的飼料原料或成品0.5—1.0克（視樣品蛋白含量的高低，高則少稱，低則多稱），無損失地轉入15ml已知重量的離心管中。每個樣品做2～3個平行。
(3)混合i準確吸取lOml腸道粗酶液，轉入需加酶液的離心管中，蓋上管塞，并充分混勻。
(4)消化：將上述已加好酶液的離心管，放到36℃的恒溫振蕩器中，振蕩頻率控制在125次／分左右。每隔30～40分鐘將每個消化管拿出來手工振蕩一次。消化時間在12～14小時（低蛋白樣品需要時間短，高蛋白樣品需要時間長）。
(5)洗滌：將消化好的樣品離心(轉速300JOr/m)15分鐘，棄去上清液，在36℃的蒸餾水洗滌2～3次。
(6)烘干：將沖洗干凈的消化好的樣品，放入烘箱中烘干，烘箱溫度控制在75～850C，直至烘至恒重。稱重并記錄。
3.1.3測定
(1)用凱氏定氮法測定消化前及消化后樣品的粗蛋白含量，記錄測定數值。
備注：空白消化率是指在樣品中加入煮沸酶液進行體外消化的消化率數值，計算方法同上。
3.2多酶片法
多酶片法比較簡單，將多酶片粉碎后直接加緩沖液并進行離心即可制得酶液，其它操作同腸道粗酶液法。
4、實驗結果
我們目前已進行了常用原料的多酶片篩選實驗與部分魚類的體外消化率實驗，下面僅介紹一下我們用多酶片法測定的部分實驗結果。
5、討論
多酶片篩選實驗結果可用于對原料的篩選上，例如我們通過大量實驗發現進口魚粉的體外消化率在88%左右，而優質國產魚粉的消化率在82%左右，于是我們可以制定出標準魚粉樣，然后拿其它的魚粉樣與之一起進行體外消化率數值的對比測定，這樣就可以淘汰不合格原料。另外我們用提取的魚腸道粗酶液對常用水產飼料原料魚粉、棉粕、豆粕、菜粕等11種原料進行體外消化試驗，發現這些原料的體外消化率值比用體內消化法測定結果低，這可能是因為體外與體內的消化環境有差異。體內消化時，未被消化的食物團到達腸道的某一部位，刺激該部位消化酶陸續釋放，而體外消化無法滿足這一條件。但從總體上看，體內消化法測定的值與體外消化法測定的值有一定的相關性。我們參照西南農大葉元土教授的試驗的數據，將用三氧化二鉻作為指示劑測定的上述飼料原料的表觀消化率與我們體外消化率測定結果相比。
由此可見體外消化率方法可以有效地評價不同水產飼料原料的品質，且所需時間短，能夠在實驗室內完成，相對于體內消化率法能節省大量的物力與財力，故體外消化率測定方法在篩選水產飼料原料上有廣泛的應用前景。
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